सेल संस्कृति प्रयोगों में, पिपेट का उपयोग बहुत बार किया जाता है, और उनके संचालन की सटीकता सीधे प्रयोगात्मक परिणामों की विश्वसनीयता और पुनरावृत्ति को प्रभावित करती है। सेल कल्चर में पिपेट ऑपरेशन के लिए निम्नलिखित कुछ सुझाव हैं, जो मुझे आशा है कि आपके प्रयोग के लिए मददगार होंगे।
1। सही पिपेट और टिप चुनें
- पिपेट चयन: हस्तांतरित किए जाने वाले तरल की मात्रा के अनुसार सही पिपेट चुनें। अधिकांश पिपेट की सामान्य ऑपरेटिंग वॉल्यूम रेंज संकेतित सीमा का 10-100% है। अधिकतम मात्रा के 10% से कम तक एक पिपेट की मात्रा को सेट करने से बचने की कोशिश करें, और छोटी-मात्रा वाले पिपेटिंग संचालन के लिए एक छोटी दूरी के पिपेट का उपयोग करें।
- टिप चयन: एक टिप चुनें जो पिपेट से मेल खाता हो और यह सुनिश्चित करे कि टिप को हवा के रिसाव से बचने के लिए कसकर डाला गया है। इसके अलावा, विशिष्ट प्रयोगों (जैसे कि सड़न रोकनेवाला संचालन) के लिए, ऑटोक्लेव्ड टिप्स का चयन किया जाना चाहिए।
2। टिप को कुल्ला
टिप में एक सजातीय फिल्म बनाने के लिए टिप 2-3 को कुल्ला, जिससे पिपेटिंग की सटीकता में सुधार होता है। इसके अलावा, यह माइक्रोप्रिपेट्स में केशिका प्रभाव को बेअसर कर सकता है, जो बड़ी मात्रा में पिपेटिंग के लिए नमूना तापमान के अनुरूप टिप के अंदर तापमान को बना सकता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि गर्म और ठंडे समाधानों को पाइप करते समय परिणामों पर रिंसिंग का प्रतिकूल प्रभाव पड़ सकता है।
3। आकांक्षा और वितरण की गति को नियंत्रित करें
- स्मूथ प्रेसिंग: अचानक दबाने और जारी करने के बजाय नियंत्रण बटन को सुचारू रूप से और लगातार जारी करें। यह बुलबुले के गठन से बच सकता है और पिपेटिंग की सटीकता में सुधार कर सकता है।
- रोकें: तरल की आकांक्षा करने के बाद, नोक को तरल में लगभग 1 सेकंड के लिए छोड़ दें, विशेष रूप से उन चिपचिपा तरल पदार्थों के लिए। टिप को तुरंत बाहर निकालने से अपूर्ण तरल आकांक्षा हो सकती है।
4। टिप की विसर्जन गहराई पर ध्यान दें
- micropipette: टिप को डुबोया जाना चाहिए 2-3 मिमी।
- बड़ी-रेंज पिपेट: विसर्जन की गहराई 5-6 मिमी होनी चाहिए। यदि टिप बहुत गहरी डूब जाती है, तो टिप के अंदर की हवा संपीड़ित हो जाएगी, जिससे बहुत अधिक तरल एस्पिरेटेड हो जाएगा। टिप की सतह पर शेष तरल भी परिणामों को प्रभावित कर सकता है।
5। ऊर्ध्वाधर संचालन
20 डिग्री से अधिक ऊर्ध्वाधर स्थिति से विचलन के बिना, अधिमानतः, अधिमानतः नमूने में पिपेट को विसर्जित करें। पिपेट वॉल्यूम की सटीकता में सुधार के अलावा, यह तरल को अत्यधिक झुकाव के कारण पिपेट में बहने से भी रोक सकता है।
6। पिपेट टिप का निरीक्षण करें
तरल का निर्वहन करने की तैयारी करते समय, इस बात पर ध्यान दें कि क्या पिपेट टिप की सतह से जुड़ी अतिरिक्त बूंदें हैं। तरल को डिस्चार्ज करने के बाद, पिपेट टिप की नोक को कंटेनर के किनारे पर छुआ जा सकता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि पिपेट टिप की नोक पर शेष होने से तरल की अंतिम बूंद को रोकने के लिए डिस्चार्ज पूरी तरह से पर्याप्त है।
7। उपयुक्त पिपेटिंग विधि चुनें
- सकारात्मक सक्शन विधि: अधिकांश तरल पदार्थों के लिए उपयुक्त। तरल चूसने पर, बटन को पहले स्टॉप पॉइंट पर दबाएं, फिर धीरे -धीरे बटन को शुरुआती बिंदु पर लौटने के लिए छोड़ दें। फिर तरल को डिस्चार्ज करने के लिए पहले स्टॉप पॉइंट पर बटन दबाएं, थोड़ी देर के लिए रुकें और शेष तरल को उड़ाने के लिए दूसरे स्टॉप पॉइंट पर बटन दबाएं। अंत में बटन जारी करें।
- बैकवर्ड सक्शन विधि: अत्यधिक चिपचिपा तरल पदार्थ, जैविक रूप से सक्रिय तरल पदार्थ, आसानी से तरल पदार्थ या बहुत कम मात्रा में तरल पदार्थों के लिए उपयुक्त है। पहले सेट रेंज की तुलना में अधिक तरल में चूसो, और तरल को स्थानांतरित करते समय शेष तरल को बाहर न उड़ाएं।
8। पिपेट को साफ रखें और बनाए रखा
- नियमित अंशांकन: समय की अवधि के लिए पिपेट का उपयोग करने के बाद, इसकी सटीकता सुनिश्चित करने के लिए इसे कैलिब्रेट करने की आवश्यकता है।
- सफाई: प्रत्येक उपयोग के बाद, अगले प्रयोग को दूषित करने से अवशिष्ट तरल से बचने के लिए पिपेट को समय पर साफ किया जाना चाहिए।
9। एसेप्टिक ऑपरेशन
सेल संस्कृति में, सड़न रोकनेवाला संचालन बहुत महत्वपूर्ण है। पिपेट का उपयोग करते समय, निम्नलिखित बिंदुओं पर ध्यान दें:
- कीटाणुशोधन: उपयोग करने से पहले, विघटन के लिए एक अल्कोहल कॉटन बॉल के साथ पिपेट और टिप को पोंछें।
- क्रॉस संदूषण से बचें: क्रॉस संदूषण से बचने के लिए प्रत्येक नमूने के लिए एक नई टिप का उपयोग करें।
उपरोक्त युक्तियों के साथ, आप सेल संस्कृति प्रयोगों के लिए पिपेट का उपयोग अधिक सटीक और कुशलता से कर सकते हैं, और प्रयोगात्मक परिणामों की विश्वसनीयता और पुनरावृत्ति में सुधार कर सकते हैं। मुझे आशा है कि ये युक्तियां आपकी मदद करेंगे!